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通用内参抗体鸡尾酒,是一种包含了免疫实验(WB、IHC-P、IF)过程中常用的抗体β-Actin、GAPDH和β-Tubulin以及抗体稀释液的套装。内参抗体种类繁多,因此,需要选择一款合适的内参抗体,应遵循以下三个原则:1.考虑样品种属,对于哺乳动物的组织和细胞,常用的内参蛋白为β-actin,Tubulin,GAPDH,LaminB1,PCNA,Na+/K+-ATPase等;对于植物样品,常用的是Plantactin和Rubisco。考虑目的蛋白分子量。2.选择的内参蛋白应与目的蛋白有不同的分子量(5KDa),以便区分目的蛋白条带。对于高分子量的蛋白质(超过kDa),我们推荐客户使用Vinculin作为内参;2.考虑目的蛋白的表达定位,选择对应的内参,比如全细胞,细胞核,线粒体,细胞膜等等。
Abbkine通用内参抗体鸡尾酒套装实验原理说明:
Fig.1.β-Actin表达的WB实验,样本分别为Ratbrain(lane1),HeLacelllysate(lane2),Mousebrain(lane3)各10ug,一抗为β-Actin小鼠单克隆抗体(1C7)(A,1:),二抗为山羊抗小鼠IgG(A,1:00)。
Fig.2.GAPDH表达的WB实验,样本分别为Hela(lane1),ratbrain(lane2),Mousebrain(lane5)各10ug,一抗为GAPDH小鼠单克隆抗体(2B5)(A,1:00),二抗为山羊抗小鼠IgG(A,1:00)。
Fig.3.β-Tubulin表达的WB实验,样本分别为Ratbrain(lane1),Acell(lane2),Mousebrain(lane3)各10ug,一抗为β-Tubulin小鼠单克隆抗体(2B5)(A,1:00),二抗为山羊抗小鼠IgG(A,1:00)。