将野生近缘植物中的优异基因导入普通小麦是拓宽小麦遗传基础、改良小麦的有效途径之一。欧山羊草Ae.biuncialis(2n=4x=28,UUMM)生长在高温和高光照的地中海和西亚地区，携带抗病、抗旱、耐盐等诸多可供小麦遗传改良的优异基因。Molnár-Láng等团队创制了一系列小麦-欧山羊草二体附加系。但是，关于欧山羊草特异分子标记的开发鲜有报导。本课题组前期创制了一系列中国春-欧山羊草衍生系材料。本研究对其中一个株系WA进行了分子细胞遗传学鉴定。利用欧山羊草DNA做探针，中国春DNA为封阻，对WA进行GISH鉴定。结果表明，WA含有44条染色体，包含1对完整外源染色体（红色杂交信号）和42条小麦染色体（由DAPI复染为蓝色）（图1a，c）。因此，WA是一个遗传稳定的小麦-欧山羊草二体异附加系。图1小麦-欧山羊草5Mb附加系染色体鉴定利用探针Oligo-pAs1.0（或Oligo-pTa）和Oligo-pSc.2对WA中外源染色体和小麦染色体进行FISH鉴定。当以Oligo-pAs1.0（红色）和Oligo-pSc.2（绿色）进行FISH鉴定时，附加的外源染色体短臂上均含有二者杂交信号（图1b）；当以Oligo-pTa和Oligo-pSc.2进行FISH鉴定时，附加的外源染色体同样含有Oligo-pSc.2的杂交信号（图1d）。为了进一步确定WA中外源染色体的遗传成分，以小伞山羊草（UU）和卵穗山羊草（MM）DNA作为探针，四倍体小麦（AABB）作为封阻（1:30），对其进行mcGISH鉴定（图2）。结果表明，WA中附加染色体属于M基因组。根据Wangetal（）发表的欧山羊草FISH模型，在7条Mb染色体中，WA中外源染色体的FISH探针杂交信号以及长短臂臂比非常接近于5Mb染色体。因此，WA是小麦-欧山羊草5Mb二体异附加系。图2以小伞山羊草（UU）和卵穗山羊草（MM）DNA作为探针，对欧山羊草（a）和小麦-欧山羊草5Mb附加系WA（b）根尖有丝分裂染色体mcGISH鉴定。a欧山羊草，U和M组染色体分别为绿色和红色；bWA，外源染色体为红色，小麦染色体为蓝色。利用简化基因组测序技术，对欧山羊草株系Y17进行测序，获得的序列与中国春序列进行比对，将同源性小于50%的序列用于开发欧山羊草特异分子标记。目前，共设计对引物，其中对具有欧山羊草特异扩增带型，筛选效率为40.33%。为了进一步将这些特异标记定位到M和U基因组上，个特异标记对欧山羊草Y17（UUMM）、小伞山羊草Y（UU）、卵穗山羊草Y（MM）和阴性对照中国春进行扩增（表1）。个标记可以扩增种带型，分为4种类型：U和M共有带型（个）、U特异扩增带型（6个）、M特异扩增带型（个）和Y17特异扩增带型（18个）。另外，这个标记对5M附加系WA进行扩增，45个标记具有特异扩增条带，为5M特异分子标记。本文开发的欧山羊草特异分子标记，可以用于小麦背景下欧山羊草及U和M基因组染色体的追踪与鉴定。Table1.DetectionofAe.biuncialisaccessionsandlineWAusingAe.biuncialisSLAFmarkers.图3欧山羊草特异分子标记电泳条带及分类与中国春相比，小麦-欧山羊草5M二体附加系WA在植株发育后期，穗部颖壳逐渐变为褐色，且较难脱粒（图4），说明5M染色体携带有与颖壳发育相关的基因。图4中国春（左）小麦-欧山羊草5Mb二体附加系WA（右）植株与穗部形态年6月5日，这一研究成果在线发表在InternationalJournalofMolecularSciences上(

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