文章的背景来源于以客户定制的单抗剩余5只小鼠，全部取血，使用ProteinA的方法纯化获得抗体，根据客户要求对纯化后抗体进行浓度和纯度鉴定。下面介绍抗体纯化所需要的仪器耗材以及实验流程。

1.抗体纯化所需的试剂与耗材

2.抗体纯化所需的仪器

3.实验方法及结果

3.1.抗体纯化

将ProteinA琼脂糖凝胶介质装入亲和纯化层析柱，将剩余的5只小鼠抗血清与PBS等量混合后缓慢上样，待抗体结合后用甘氨酸洗脱缓冲液洗脱，即得到所需纯化抗体，立即在PBS中进行4度透析过夜，隔日进行纯度，浓度测定。

3.2.抗体鉴定

通过ELISA检测纯化抗体的效价，利用BCA蛋白浓度测定试剂盒对所得抗体进行浓度测定；通过SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝染色观察纯化抗体的纯度。

3.2.1.纯化抗体间接ELISA效价检测

具体操作如下：

（1）根据实验需要设计好包被板，并在板条上做上标记。

（2）用PBS包被液将亚单位疫苗蛋白抗原稀释成需要的浓度，混匀后加入板条中，每孔ul，4℃冰箱过夜。包被抗原：亚单位疫苗蛋白包被浓度：5μg/ml，μl/孔包被缓冲液：磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.4)

（3）包被好后，弃去包被液，洗板3次，每孔加入μl封闭液，37℃恒温箱1h。取出酶标板，弃去内液，洗板1次。

（4）纯化抗体按1/，2倍稀释，每孔μl，37℃恒温箱1h。

（5）取出酶标板，弃去内液，洗板3次，向每孔中加入μl稀释好的酶标二抗，酶标二抗：山羊抗鼠-HRP，1/0。37℃恒温箱1h。

（6）取出酶标板，弃去内液，洗板4次，每孔先加入μlTMB显色液，根据颜色的深浅决定显色时间，一般37℃，15min。

（7）每孔加入μl1MHCl溶液，终止反应。即刻在酶标仪上nm读数，将OD值大于设定的阴性对照OD值的2.1倍的孔对应的稀释度，定为该样品的效价。

具体结果如下：包被抗原：亚单位疫苗蛋白包被浓度：5μg/ml，μl/孔包被缓冲液：磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.4)二抗：山羊抗兔-HRP，1/0

3.2.2.抗体浓度、体积

抗体浓度:0.45mg/ml体积：3.0ml缓冲液:磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.4)

3.2.3.抗体纯度鉴定

纯化后抗体进行SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝染色.可见抗体纯化后纯度在85%以上。