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海马体主要负责记忆和学习，日常生活中的短期记忆都储存在海马体中。神经元是构成神经系统结构和功能的基本单位。神经元具有长突起，由细胞体和细胞突起构成。小鼠海马神经元细胞的组织来源于实验小鼠的正常脑组织，因为海马神经元细胞类似于干细胞属于高分度分化的细胞特性，具有不能传代，不能增殖等特点，所有收到细胞后尽快使用。为了更好的服务于广大科研工作者，赛百慷技术人员特提供了海马神经元细胞分离培养方法，技术因人而异仅供参考：1.试验所需仪器设备及试剂（1）仪器生物安全柜CO2细胞培养箱荧光倒置显微镜高速冷冻离心机电热恒温鼓风干燥箱（2）试剂耗材T25细胞培养瓶血球计数板细胞培养孔板红细胞裂解液神经元完全培养基0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA）多聚甲醛（PFA）DAPITritonX-山羊血清NSEGoatanti-RabbitlgG（H+L）Cross-AdsorbedSecondaryantibody，AlexaFluorFluoromount-G荧光封片剂2.分离培养方法1)取1-10d的新生小鼠。用75%的乙醇浸泡，2)在冰浴的PBS中分离海马，PBS洗涤3次，剪碎，3)用0.25%Trypsin+0.1%Ⅰ型胶原酶37℃水浴振荡消化30min，4)用FBS终止消化，轻轻吹打，5)过μm滤网，6)收集滤液，g离心5min，7)用完全培养基重悬沉淀，铺瓶。3.免疫荧光3.1.实验步骤（1）细胞爬片取3片玻璃片于24孔板中，每孔加入培养基1mL，加入细胞0.02million个/孔。置培养箱2h或过夜。（2）固定细胞爬片后，吸出培养基，用PBS洗1遍，加入4%PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可最后一次不吸出PBS，放4℃过夜。（3）破膜封闭将玻片除去水分，置于培养皿支撑物上，玻璃片封闭液配置：0.5%TritionX-与PBS1:1混合，再加10%血清，取50uL破膜封闭液滴于防水膜上，将玻片上有细胞的一面盖上2h。（4）一抗孵育一抗配制：抗体与PBS1:（）稀释破膜封闭后，取50uL一抗于防水膜上（湿盒中），将玻片（有细胞的一面）盖上置于4℃（最多可放置一周）（5）二抗孵育室温避光孵育二抗（二抗:PBS=1:）2h后，PBS洗3×5min/次，染DAPI（DAPI:PBS=1:0）5min，PBS洗3×5min/次。（6）包埋玻片上各滴1滴Fluoromount-G，将有细胞的一面盖上。鉴定细胞为P1代细胞3.2.检测结果（1）细胞免疫荧光鉴定照片阴性X-DAPINSEX-DAPI（2）检验基本情况：经免疫荧光鉴定，该细胞纯度达到90%以上。除了上述的细胞分离方法以外，赛百慷还有很多关于其他细胞的分离方法，想要学习的小伙伴可以来赛百慷进行现场学习，如果想要其他原代分离培养方法，可打电话或咨询相关技术人员哦。

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