理论上哄骗公认抉择的亲和纯化抗体可获得高稀奇性，高敏锐度的免疫测定。但是，由于经济起源或是缺少适宜的试剂，使得很多劳动者采纳低纯度的成品，这类试剂每每含有与实验中此外成份起穿插反响的抗体。现已发掘在用抗人IgG抗血清的抗体时，抗体中含有不须要的抗体穿插反响。但当哄骗亲和纯的抗血清时，穿插反响不显然。钻研任何ELISA系统，为了节制不须要的穿插反响，就要鄙弃哄骗亲和纯试剂。哄骗抗IgG血清抗体做为包被抗体，偶然本底确凿很低，但它的敏锐度比仅哄骗亲和纯成品要低50-倍。在高敏锐度的实践中运用关闭试剂是很首要的。最后抉择非亲和纯抗IgG血清抗体是基于如此想象：包被抗体或是分离的人IgG（抗原）与差遣抗体有穿插反响，则过多的与差遣抗体同种动物的血清，就也许关闭与酶标抗体的不要的分离。但是人血皎皎卵白中含有小批的IgA和IgG会困扰探测。人血皎皎卵白只合用于IgE的测定。一样，不能用牛血皎皎卵白。由于此中含有微量的牛IgG。

抗血清抗体与亲和纯抗体对ELISA夹心法成果的影响可从上面实践看出。

实践a：包被抗体为粗制的绵羊抗人IgG抗体，差遣抗体（检抗）为粗制山羊抗人IgG抗体

实践b：包被抗体为亲和纯的绵羊抗人IgG抗体，差遣抗体（检抗）为粗制山羊抗人IgG抗体

实践c：包被抗体为粗制的绵羊抗人IgG抗体，差遣抗体为亲和纯的山羊抗人IgG抗体

实践d：包被抗体和差遣抗体都是亲和纯的兔抗人IgG抗体。

实践中哄骗5%血清（与差遣抗体同物种泉源）举办关闭，其余夹心法ELISA环节不异。

成果显示，当粗制的抗IgG血清抗体被用在夹心法的两头（真实践a弧线）时，本底很高且弧线坡度不显然。即使能胜利运用此抗体类别，但题目是一种抗体分离另一种抗体。也许产生了山羊差遣抗体分离了绵羊包被抗体，由于稀释液中的山羊血清多余也不能低沉本底值。当运用亲和纯化的包被抗体时（真实践b弧线），本底合适低沉并且孕育了准则弧线。但是，大多半劳动者以为本底仍偏高，劳动规模有限（2-60ng/ml）。当亲和纯的差遣抗体与粗制包被抗体毗连使历时（真实践c弧线），本底大大较低，但敏锐度约为-ng/ml，再者劳动规模仍受限。当齐全哄骗亲和纯的抗体时（真实践d弧线），本底低，敏锐度大大改进且劳动规模广（2-ng/ml）。